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05
2012
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酶聯免疫吸附法（ELISA）試驗小常識
所屬分類：
一、平衡：
操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
二、加樣：
1、標本為血清：最好將血液先自然存放l-2小時后，再用3000rmp離心15分鐘；
2、標本為血漿：必須使用含抗凝劑的血液標本收集管，采血后必須立即顛倒采血管混合5-10次，放置一段時間后，3000rmp離心15分鐘;若在幾天內檢測，可放在2-8℃冰箱中，若要貯存，則置于-20℃的低溫冰箱內；
3、加樣后及時放入孵箱，加酶試劑后用吸水紙在酶標板表面輕拭吸干；
4、定期校驗移液器，移液器與槍頭要配套，移液不宜太快，排放要完全，槍頭最好一次性使用；
5、標本較多時，應分批操作。
三、孵育：
1、貼封片或加蓋；
2、用定時鐘準確計時；
3、定期校驗恒溫箱；
4、在振蕩器上充分混勻再放入恒溫箱。
四、洗板：
1、保證洗液注滿各孔，但不要溢出，洗板針暢通，洗完板后最好在吸水紙（選擇干凈，無或少塵的吸水材料）上輕輕拍干；
2、合理安排，或多用幾臺洗板機；
3、配洗液應使用純凈的蒸餾水，并防止被污染。
五、顯色：
1、顯色劑盡量在臨用前配制，堅持不用過期顯色劑，肉眼可見淺藍色的TMB顯色劑不用；
2、加樣時保持顯色劑不外流。
六、終止：
加終止液時應避免產成氣泡。
七、讀板：
1、清潔酶標板；
2、定期校驗酶標儀，TMB顯色使用450nm波長。
八、全過程：
1、盡量使用移液器加液，如用滴瓶應保證滴瓶垂直向下，持力均勻，滴速不宜過快，每孔一滴；
2、孵育的時間和溫度應嚴格控制，嚴格按說明書操作；
3、不同批號、不同品種的試劑組份不能交叉使用；
4、試劑盒應在4～8℃儲存，不要長時間置于常溫下或反復凍融，用剩的試劑應把瓶子蓋好，板條放在密實袋內，保存在合適的環境中，盡快用完。